식품공전 미생물 바실러스 세레우스 정성시험 정량시험 실험방법

바실러스 세레우스는 일상생활에서 많이 접할 수 있는 균으로 정성시험, 정량시험 두가지로 진행하며 시험방법에 대해 알아보겠습니다.

출처 : Pixabay

바실러스 세레우스란?

바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 행태적 특성이 탄저균과 유사하며 사람에게 직접적으로 식중독을 일으키는 균으로 식품공전에서도 실험을 진행합니다. 토양세균의 일종으로 자연계에 널리 분포해 있으며 흙에도 많기 때문에 자연적으로 많이 접촉할 수 있는 균 입니다. 그렇기 때문에 농장물, 식품 등에서 대부분 오염되어 있으며 세척 시 제거가 잘 되지 않습니다. 내열성이 강하기 때문에 가열 조리를 해도 생존하지만 소량으로 섭취해도 상대적으로 식중독에 대한 발생 빈도는 낮은 편 입니다.

 

바실러스 세레우스 실험 배지

(배지 46)MYP 한천배지(Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar) 배지 조성
Beef Extract - 1 g / Peptone - 10 g / Mannitol - 10 g / Sodium Chloride - 10 g / Phenol Red - 0.025 g / Agar - 15 g
(서플리먼트)Polymyxin B 용액(10,000unit/mL) 2.5 mL와 난황액(시액 8) 12.5 mL

 

(배지 98) PEMBA한천배지 배지 조성
Enzymatic digest of casein - 1.0 g / Mannitol - 10.0 g / Sodium Chloride - 2.0 g / Magnesium Sulfate - 0.1 g / Disodium hydrogen phosphate - 2.5 g / Potassium dihydrogen phosphate - 0.25 g / Sodium Pyruvate - 10.0 g / Bromothymol Blue - 0.12 g / Agar - 9∼18 g
(서플리먼트)Polymyxin B 용액 100,000 IU와 난황액(시액 8) 50 mL

 

바실러스 세레우스 정성시험 시 증균배양은 왜 하지 않나요?

보통 다른 균들을 실험할 때 정성시험 시 증균배양을 합니다. 증균배양을 하지 않으면 균이 제대로 나오지 않을 수 있기 때문에 해당 균을 더 잘 검출하기 위해서 내가 검출하려는 균을 증균배양 해서 균을 더 키우고 분리배양에서 그 균만 골라내는 실험 단계를 거칩니다. 그렇기 때문에 증균배양을 진행하는 건데요, 다른 균들의 경우 1차 증균을 하고 살모넬라 등은 1차 증균 후 2차 증균까지 진행하는 것도 볼 수 있습니다. 하지만 바실러스 세레우스는 흙만 퍼도 나오는 균이고 농산물, 식품 등 워낙 많은 곳에서 나오고 균 수가 많이 나오기 때문에 정성시험을 진행할 때도 별도의 증균배양 없이 실험을 진행합니다.

 

바실러스 세레우스 정성시험 실험방법

- 분리배양

1. 0.85% Saline(멸균희석액) 225ml와 검체 25g또는 25ml를 잘 섞이도록 균질화 해줍니다.

2. Polymyxin B와 Egg yolk emulsion을 첨가한 MYP 한천배지 또는 PEMBA 한천배지에 균질화한 시액을 스트레킹 후 배양 합니다. MYP 한천배지 : 30℃, 24시간 배양 / PEMBA 한천배지 : 37℃, 24시간 배양

3. 배양 후 결과를 확인합니다.

MYP 한천배지 의심집락 : 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락, PEMBA 한천배지 의심집락 : 혼탁한 환을 갖는 청녹색 집락

※결과 확인 시 명확하지 않은 경우 24시간 더 배양 합니다.

- 확인시험

분리배양 실험에서 의심집락으로 확인된 균은 확인시험을 진행합니다. 의심 집락은 Nutrient agar 또는 TSA배지에 배양 후 그람염색, 생화학 실험 등을 진행해 확정합니다.

 

바실러스 세레우스 정량시험 실험방법

- 균수 측정

1. 0.85% 멸균생리식염수 225ml에 검사하려는 검체 25g 또는 25ml를 넣고 2분간 고속으로 균질화 합니다.

※ 균질 시 자동균질기를 사용하면 간편하게 균질화가 가능합니다.

2. 균질화한 시액은 10배 단계 희석액을 만들어줍니다.

3. 희석액을 MYP 한천배지 3~5장에 총 접종액이 1ml가 되도록 나눠서 도말 합니다.

Ex) 각 0.2ml 씩 MYP 한천배지 5장

4. 희석액을 도말한 MYP배지는 30℃에서 24±2시간 배양 후 집락 주면에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수 합니다.

- 확인시험

정성시험의 확인시험과 동일하게 진행합니다.

- 균수계산

계수한 균수에 희석배수를 곱하여 계산합니다.