식품공전 미생물 리스테리아 모노사이토제네스 실험방법

리스테리아 모노사이토제네스는 육류, 우유 및 유제품 등 여러 제품에서 발생할 수 있으며 식중독을 발생시킬 수 있으며 정성시험으로 진행합니다. 시험 방법에 대해 알아보겠습니다.

출처 : Pixabay

리스테리아 모노사이토제네스란?

리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)는 그람 양성, 비운동성, 무아포성 단간균 입니다. 8가지의 균종이 있으며 2가지의 균종이 주로 인체 감염에 영향을 주는데 리스테리아 모노사이토제네스와 리스테리아 이바노비 입니다. 식중독을 일으키는 균은 대부분이 모토사이토제네스며 이바노비에 의한 감염은 흔하지 않아 식품공전에서는 리스테리아 모토사이토제네스를 주로 실험합니다. 육류, 우유 및 유제품, 해산물, 채소, 샐러드, 샌드위치 등에서 발생할 수 있어 주의를 요합니다.

 

리스테리아 모노사이토제네스 실험 배지 제조법

(배지 35) Listeria 증균배지(Listeria Enrichment Broth) 배지 조성
Tryptone - 17 g / Soytone - 3 g / Glucose - 2.5 g / Sodium Chloride - 5 g / Dipotassium Phosphate - 2.5 g / Yeast Extract - 6 g / Cycloheximide - 0.05 g / Acriflavin HCl - 0.015 g / Nalidixic Acid - 0.04 g
위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다.

 

(배지 38) Oxford 한천배지(Oxford Agar) 배지 조성
Columbia blood agar base - 39 g / Esculin - 1 g / Ferric ammonium citrate - 0.5 g / Lithium chloride - 15 g / Agar - 2 g
위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균하고 50°C정도로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.
(서플리먼트 조성)
Cycloheximide - 0.4 g / Colistin Sulfate - 0.02 g / Acriflavin - 0.005 g / Cefotetan - 0.002 g / Fosfomycin - 0.01 g

 

리스테리아 모노사이토제네스 실험 방법(증균배양)

- 수산물 및 가공식품 : LEB 225ml + 검체 25g 또는 25ml → 30℃, 48시간 증균 배양합니다.

- 식육가공품, 유가공품, 알가공품, 식육 및 가금류 : 1차증균 : LEB, PALCAM Broth, UVM-MLEB, Half Fraser(중 택1) 225ml + 검체 25g 또는 25ml → 30℃, 24±2시간 증균 배양합니다.

2차증균 : Fraser Broth 10ml + 1차증균 배양액 0.1ml → 35~37℃, 24~48시간 배양합니다.

※식품 별로 해당되는 증균방법으로 진행해 주세요.

 

리스테리아 모노사이토제네스 실험 방법(분리배양)

식품별로 증균단계를 거친 후 증균 배양액을 Oxford Agar 또는 LPM 한천배지 또는 PALCAM Agar 또는 ALOA 한천배지 중 한가지 배지에 접종 후 35~37℃에서 24~48시간 배양 후 의심 집락을 확인합니다.

※ 여기서 의심 집락은 0.6% yeast extract가 포함된 Tryptic soy 한천배지(배지 40)에 접종해 30℃, 24~48시간 배양합니다.

※ 보통 Oxford Agar를 제일 많이 사용하며 양성 콜로니는 군집 주변 갈색 또는 검은색 침착의 콜로니를 형성합니다.

 

리스테리아 모노사이토제네스 실험 방법(확인시험)

TSA배지에 계대배양한 의심콜로니를 그람염색 후 그람양성 간균을 확인합니다. 이후 당분해 시험과 PI-PLC 반응시험을 실시하고 분리 배양 시 ALOA 한천배지를 사용한 경우 PI-PLC 반응시험을 생략할 수 있습니다. 당분해 시험 중 Hemolysis에 대한 부가시험으로는 CAMP TEST를 할 수 있으며, 그 결과 Staphylococcus aureus(ATCC 25923) 양성, Rhodococcus equi(ATCC 6939)에서 음성이 나타나는 경우 리스테리아 모노사이토제네스 양성으로 판정합니다.