식품공전 미생물 비브리오 패혈증균 실험방법

비브리오 패혈증균을 검출할 수 있는 실험 방법에 대해 알아보겠습니다.

출처 : Pixabay

비브리오 패혈증균이란?

비브리오 패혈증균(Vibrio vulnificus)은 Vibrionaceae 과에 속하는 그람 음성 간균으로 해수 온도가 상승하는 여름철에 많이 발생하며 비브리오균에 오염된 해산물을 날것으로 섭취할 경우 감염될 수 있으며 3일 이내의 잠복기를 가지며 발열, 오한, 구토, 복통 등을 동반합니다. 이 균을 예방하기 위해서 60℃ 이상의 열로 충분히 조리 후 섭취해야 합니다. 바닷물의 온도가 18~20℃이상으로 상승될 때 증식되어 여름과 가을에 해산물을 날것으로 섭취하는 경우 감염될 확률이 올라가 날 것 섭취시 주의해야 합니다.

 

비브리오 패혈증균 실험 배지

(배지 16) Alkaline 펩톤수(Alkaline Peptone Water) 배지 조성
Peptone - 10 g / Sodium Chloride - 20 g

(배지 17) TCBS 한천배지(Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar) 배지 조성
Yeast Extract - 5 g / Peptone - 10 g / Sodium Citrate - 10 g / Sodium Thiosulfate - 10 g / Oxgall - 5 g / Sodium Cholate - 3 g / Sucrose - 20 g / Sodium Chloride - 10 g / Ferrous Citrate - 1 g / Bromothymol Blue - 0.04 g / Thymol Blue - 0.04 g / Agar - 15 g

(배지 101) mCPC 한천배지(Modified Cellobiose- Polymyxin B-Colistin agar) 배지 조성
Peptone - 10.0 g / Beef extract - 5.0 g / Sodium chloride - 20.0 g / 1000× Dye stock solution* - 1.0 mL / Agar - 15.0 g
+mCPC agar supplement 첨가

 

 

비브리오 패혈증균 실험 방법(증균배양, 분리배양)

1. 증균배양

검사 하려는 검체 25g 또는 25ml 를 채취해 Alkaline Peptone Water(APW) 225ml에 넣고 35~37℃에서 18~24시간 동안 증균 배양 합니다.

2. 분리배양

검체와 APW배지를 증균한 증균 배양액을 TCBS 한천배지와 mCPC 한천배지에 각각 접종 하고 35~37℃에서 18~24시간 배양 합니다.

- TCBS 한천배지 : 청록색의 sucrose 비분해 집락

- mCPC 한천배지 : 노란색 집락

 TCBS 한천배지와 mCPC 한천배지의 양성 집락에 대해 확인시험을 진행합니다.

 

비브리오 패혈증균 실험 방법(확인시험)

TCBS 한천배지와 mCPC 한천배지의 양성 집락을 LIM 반유동배지(배지 18), 2% NaCl을 첨가한 Nutrient agar(배지 8)에 각각 접종하고 35~37℃에서 18~24시간 배양합니다. 그람음성의 무아포간균을 확인하기 위해 LIM배지에서 운동성 양성, Indole 생성, Lysine Decarboxylase 양성, Oxidase시험 양성을 확인하고 내염성 시험을 위해 0, 6, 10% NaCl을 포함한 APW배지에 배양한 후 0%, 10% NaCl을 포함한 배지에서 발육 음성, 6% NaCl을 포함한 배지에서는 발육 양성을 확인합니다. 추가로 Arginine 분해 음성, ONPG 시험 양성을 확인 합니다.

 

비브리오 패혈증균 신설배지

원래 식품공전 내에서는 장염비브리오에 대한 실험만 진행했는데 식품에 대한 안전성을 향상하기 위해 추가로 비브리오 패혈증균 실험이 신설되면서 mCPC 한천배지(Modified Cellobiose- Polymyxin B-Colistin agar)가 배지 101번으로 신설되었습니다. 장염비브리오를 시험하는 TCBS와 mCPC 한천배지를 각각 사용함으로 균을 더욱 잘 검출 할 수 있도록 하며 TCBS 배지에서는 장염비브리오와 비브리오 패혈증균 둘다 검출이 되지만 mCPC 한천배지에서는 장염 비브리오는 검출되지 않아 선택배지로 사용하기 좋습니다.