식품공전 미생물 황색포도상구균 정성시험 실험방법

배지를 이용해 황색포도상구균을 검출할 수 있는 정성시험 시험방법에 대해 알아보겠습니다.

황색포도상구균 정성시험 시험방법

출처 : Pixabay

황색포도상구균이란?

황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 구균 속에 속하는 세균 중 하나로 특히 피부 및 점막막에 많이 존재합니다. 정상적인 상태에서 발견되면 별다른 문제를 일으키지 않지만 상처, 피부 손상으로 인한 체내로 침입해 감염을 일으키는 경우 폐렴, 피부 감염, 식중독 등을 발생시킬 수 있습니다. 음식 조리나 보관 단계에서 황색포도상구균에 대한 식중독이 발생될 수 있으며 음식을 오랫동안 방치하거나 잘못된 조리 방법, 냉장하지 않는 등이 원인이 될 수 있습니다. 주로 검출되는 식품으로는 육류, 가금류, 생선, 달걀, 치즈, 크림, 버터 등이 있습니다.

 

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황색포도상구균 실험 배지 제조법

(배지 23) TSB 배지(Tryptic Soy Broth) 배지 조성
Tryptone - 17 g / Soytone - 3 g / Dextrose - 2.5 g / Sodium Chloride - 5 g / Dipotassium Phosphate - 2.5 g
위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다.

 

(배지 14) 난황첨가 만니톨 식염한천배지(Mannitol Salt Agar with Egg Yolk)
Beef Extract - 2.5 g / Peptone - 10 g / Mannitol - 10 g / Sodium Chloride - 75 g / Agar - 15 g / Phenol Red - 0.025 g
위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 가열 용해한 후 pH 7.2～7.6으로 조정한 후 121°C에 서 15분간 멸균하고 50°C정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%의 비율로 무균적으로 가해 잘 혼합한 후 사용한다.

 

(배지 63) Baird-Parker 한천배지(Baird-Parker Agar)
Tryptone - 10 g / Beef Extract - 5 g / Yeast Extract - 1 g / Sodium Pyruvate - 10 g / Glycine - 12 g / Lithium Chloride 6H2O - 5 g / Agar - 20 g
위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다. 이를 50°C정도로 식힌 다음 0.1% Potassiun Tellurite가 첨가된 난황액(시액 8) 50 mL을 첨가한다.

 

황색포도상구균 실험 - 정성시험 증균배양

10% NaCl을 첨가한 TSB 배지(배지 23) 225ml에 검체 25ml 또는 25g을 넣고 35~37℃, 18~24시간 증균배양 합니다.

※ 10% NaCl을 첨가한 TSB 배지 제조법은 TSB 배지 제조법에 따라 TSB 배지를 미량저울로 계량한 후 증류수를 포함한 배지 총 볼륨 기준 10%의 NaCl을 계량해 배지와 함께 혼합 후 오토클레이브에서 121℃, 15분간 멸균합니다.

※ 시험조작의 무균여부에 확인은 검체를 가하지 않은 10% NaCl을 첨가한 TSB배지를 대조시험액으로 확인합니다.

 

황색포도상구균 실험 - 정성시험 분리배양

증균배양을 마친 증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(MSA/배지 14) 또는 Baird-Parker 한천배지(배지 63)또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지(배지 67)에 접종한 후 35~37℃에서 18~24시간 배양합니다. 배양결과 의심집락으로는 MSA배지는 황색 불투명한 집락을 나타내고 주변에 혼탁한 백색 환이있는 집락, BPA배지는 투명한 띠로 둘러싸인 광택이 있는 검은 집락, BPA(RPF)배지는 BPA배지와는 비슷하지만 불투명한 환으로 둘러싸인 검정 집락을 확인하면 확인시험을 진행합니다.

 

황색포도상구균 시험 - 정성시험 확인시험

분리배양 실험에서 의심집락으로 확인된 콜로니를 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 스트레킹 후 35~37℃, 18~24시간 계대배양 후 그람염색을 실시하여 포도상의 배열의 그람양성의 구균을 확인합니다. 그 다음 Coagulase 시험으로 24시간 이내에 응고 유무를 판정하고 이 때 BPA(RPF)배지에서 의심 집락은 Coagulase 시험을 생략할 수 있습니다. Coagulase 양성으로 확인된 경우 생화학 시험을 실시해 황색포도상구균이 맞는지 판정합니다.